Snake Venomics and Antivenomics of Bothrops diporus, a Medically Important Pitviper in Northeastern Argentina

Snake species within genus Bothrops are responsible for more than 80% of the snakebites occurring in South America. The species that cause most envenomings in Argentina, B. diporus, is widely distributed throughout the country, but principally found in the Northeast, the region with the highest rates of snakebites. The venom proteome of this medically relevant snake was unveiled using a venomic approach. It comprises toxins belonging to fourteen protein families,be ing dominated by PI- and PIII-SVMPs, PLA2 molecules, BPP-like peptides, L-amino acid oxidase and serine proteinases. This toxin profile largely explains the characteristic pathophysiological effects of bothropic snakebites observed in patients envenomed by B. diporus. Antivenomic analysis of the SAB antivenom (Instituto Vital Brazil) against the venom of B. diporus showed that this pentabothropic antivenom efficiently recognized all the venom proteins and exhibited poor affinity towards the small peptide (BPPs and tripeptide inhibitors of PIII-SVMPs) components of the venom.Fil: Gay, Claudia Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Sanz, Libia. Instituto de Biomedicina de Valencia; EspañaFil: Calvete, Juan J.. Instituto de Biomedicina de Valencia; EspañaFil: Pla, Davinia. Instituto de Biomedicina de Valencia; Españ

Actividad antioxidante de hidrolizados proteicos de caupí (variedad cuarentón) obtenidos por digestión enzimática

El caupí (vigna unguiculata (L.) Walp.) es una leguminosa cultivada en el Nordeste Argentino con un elevado contenido de proteínas (23-26%) de buena calidad nutricional. Constituye una atractiva materia prima de péptidos bioactivos para su incorporación en alimentos. El objetivo fue estudiar la actividad antioxidante de péptidos obtenidos por hidrólisis enzimática a partir de proteínas de caupí. Aislados proteicos se obtuvieron a diferentes pH de extracción pH 8 (A8) y pH 10 (A10). Los hidrolizados fueron generados con alcalasa (≥ 2.4 U/g; 37° C, 4 h) en relación μl enzima/mg muestra: 0,8/100 (bajo grado de hidrólisis: A8LH y A10LH) y 8/100 (alto grado de hidrólisis: A8HH y A10HH). En cuanto al grado de hidrólisis (método TNBS), A8LH presentó un valor significativamente menor respecto a A10LH (2,28 y 4,60%) mientras que A8HH y A10HH alcanzaron un mayor grado de hidrólisis (24 y 26%). Los perfiles electroforéticos (SDS-PAGE-ME 15%) mostraron que en A8LH y A10LH la hidrólisis provocó desaparición de algunos polipéptidos con masas moleculares >20 kDa y un incremento de polipéptidos <20 kDa. En A8HH y A10HH se visualizaron bandas <20 kDa. A8 y A10 presentaron similar actividad antioxidante medida por ABTS·+ (IC50A8=23,54 mg/mL, IC50A10=22,78 mg/mL). La hidrólisis incrementó significativamente la actividad antioxidante con respecto al aislado: los IC50 de A8LH y A8HH fueron un 74% y 83% menor que A8, respectivamente. Un comportamiento similar se observó para A10LH y A10HH respecto a A10. Los resultados obtenidos brindan información relevante, mostrando un aumento de la actividad antioxidante por efecto de la hidrólisis con alcalasa. Posteriores estudios se realizarán por otros mecanismos de neutralización de radicalesFil: Gómez, Andrea Gisella. Universidad Nacional del NordesteFil: Gay, Claudia Carolina. Universidad Nacional del NordesteFil: Avanza, María Victoria. Universidad Nacional del Nordest

Purification of a fragment obtained by autolysis of a PIIIb-SVMP from Bothrops alternatus venom

Snake Venom Metalloproteinases (SVMPs) represent 43.1% of the components in Bothrops alternatus venom and play an important role in envenomation. Disintegrins and disintegrin-like domains are released by proteolytic processing of PII and PIII classes of SVMPs respectively and are potent inhibitors of integrin–ligand interaction. Baltergin is a PIIIb-SVMP isolated from this venom and able to undergo autolysis in vitro, giving rise to a stable disintegrin-like/cystein-rich fragment (baltergin-DC). Conditions of baltergin autolysis were adjusted in order to carry out the purification of baltergin-DC and its effect on cell adhesion was studied. Autolysis was maximal at 37 °C and a pH range of 7.0–8.0. Baltergin-DC amino-terminal sequence begins with IISPPVCGNELLEVGEECDCGTPENCQNECCDAATC, which shows a high degree of homology with other disintegrin-like proteins. Baltergin and purified baltergin-DC were both able to inhibit C2C12 adhesion to fetal bovine serum (FBS) coated plates, indicating that a non-catalytic process is involved, probably mediated by binding to membrane integrins. Baltergin-DC, lacking proteolytic action, becomes an attractive molecule for future studies on blocking integrin–ligand interactions.Fil: Van de Velde, Andrea Carolina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Departamento de Bioquímica. Laboratorio de Investigación en Proteínas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Gay, Claudia Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Departamento de Bioquímica. Laboratorio de Investigación en Proteínas; ArgentinaFil: Olivera Moritz, Milene Nobrega de. Universidade Federal de São Carlos; BrasilFil: dos Santos, Patty Karina. Universidade Federal de São Carlos; BrasilFil: Bustillo, Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Rodríguez, Juan Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; ArgentinaFil: Acosta, Ofelia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Biscoglio, Mirtha Josefa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas "Prof. Alejandro C. Paladini". Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; ArgentinaFil: Sobreiro Selistre de Araujo, Heloisa. Universidade Federal de São Carlos; BrasilFil: Leiva, Laura Cristina Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Química Básica y Aplicada del Nordeste Argentino; Argentin

Cross-neutralization of the coagulant activity of Crotalus durissus terrificus venom from the northeast of Argentina by bivalent bothropic antivenom

Cross-neutralization of Crotalus durissus terrificus venom coagulant activity was tested using bivalent horse antivenom against Bothrops alternatus and Bothrops diporus venoms. Our in vitro and in vivo experiments showed that bothropic antivenom neutralizes the thrombin-like activity of crotalic snake venom and this cross-reaction was demonstrated by immunoassays either with whole venom or a purified thrombin-like enzyme. These results suggest common antigenic properties and, consequently, similar molecular structure among venom thrombin-like enzymes. Besides, they provide information that could be further used in the development of new antivenom formulations.Fil: Rodríguez, Juan Pablo. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Departamento de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; ArgentinaFil: Gay, Claudia Carolina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Departamento de Bioquímica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; ArgentinaFil: Fusco, Luciano Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Departamento de Bioquímica; ArgentinaFil: Gauna Pereira, María del Carmen. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Departamento de Bioquímica; ArgentinaFil: Acosta, Ofelia Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste; Argentina. Universidad Nacional del Nordeste; ArgentinaFil: Leiva, Laura Cristina Ana. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Departamento de Bioquímica; Argentin

Evaluación in vitro de la actividad proteolítica de células de carcinoma renal de células claras (Caki-1) en condiciones de hipoxia

La proteólisis extracelular es uno de los principales mecanismos por lo que la transformación de la matriz intercelular se desarrolla, y facilita la metástasis tumoral. Las enzimas que la catalizan se denominan metaloproteinasas de la matriz (MMPs); son proteinasas pertenecientes a una amplia familia, que se asocian con tumorigénesis, renovación de la matriz extracelular y la migración de células cancerosas, control del crecimiento, inflamación y angiogénesis. Dados estos roles tan centrales en la biología del cáncer, desde hace tiempo vienen siendo estudiadas, pero son prácticamente inexistentes los trabajos que las relacionan con su expresión en condiciones hipóxicas y más aún en Carcinoma Renal de Células Claras (CRCC). Por tal motivo, en el presente trabajo, se inició la caracterización de la expresión de MMPs secretadas por células Caki-1, modelo celular ampliamente validado para el CRCC. Utilizando un modelo in vitro de cultivo celular se generó hipoxia con el agregado de CoCl2 (100, 200 y 300 μM) y se evaluó si la hipoxia influye en la actividad proteolítica del sobrenadante celular. Se utilizó SDS-PAGE para analizar el perfil proteico y la técnica de zimografía para determinar la actividad gelatinolítica. Asimismo, se estudió la expresión de las MMPs (2, 9 y 13) por Dot-Blott. Los resultados hallados muestran que la hipoxia exacerba la actividad proteolítica de estas células, y que en dicha actividad están implicadas las enzimas MMP-2 y MMP-13, principalmente y en menor grado MMP-9, secretadas al medio extracelular. Actualmente, se está expandiendo la búsqueda de otras isoformas de MMPs (tales como MMP1, MMP8, MMP 21) y evaluando su expresión en el otro modelo validado de CRCC, las células Caki-2Fil: Palomar, Lucas Sebastián. Universidad Nacional del NordesteFil: Melana Colavita, Juan Pablo. Universidad Nacional del NordesteFil: Aguirre, María Victoria. Universidad Nacional del NordesteFil: Gay, Claudia Carolina. Universidad Nacional del NordesteFil: Rodríguez, Juan Pablo. Universidad Nacional del Nordest